Mensaje de error

  • Notice: Undefined variable: ub en my_visitors_get_count() (línea 254 de /home/fundamentosc/public_html/sites/all/modules/my_visitors/my_visitors.module).
  • Notice: Undefined variable: ub en my_visitors_get_count() (línea 266 de /home/fundamentosc/public_html/sites/all/modules/my_visitors/my_visitors.module).

 

WESTERN BLOT

Es una prueba usada para identificar una proteína específica (antígeno) dentro de una mezcla de proteínas, que fueron obtenidas por separación electroforética de proteínas de extractos celulares, de virus o de tejidos, cuyo mecanismo de acción de la prueba se basa en la detección de esta proteína por medio de anticuerpos directos e indirectos.

Es una prueba similar al ELISA, cuyas semejanzas y diferencias son:

.- Semejanzas entre ELISA y Western Blot

  • Ambas son pruebas que se basan en la reacción Ag-Ac.
  • Ambas pruebas usan el inmunoensayo.

.- Diferencias entre ELISA y Western Blot.

  • Por ELISA detectamos antígenos (ELISA directo o Sándwich) o anticuerpos (ELISA indirecto)
  • Por Western Blot, solo se detecta antígenos.
  • El Western Blot es más demorada que el ELISA para su realización.
  • El ELISA puede cuantificar la cantidad de Ac o Ag presentes en la muestra, mientras que el Western Blot solo dice si está presente un antígeno o no.
  • El Western Blot es menos sensible que el ELISA, pero es más específica.
  • Los resultados del ELISA es un número y las del Western Blot puede ser una foto de la electroforesis mostrando la proteína (antígeno) presente en la muestra de sangre.

 

La técnica del Western Blot es:

1).- Producción en cultivos celulares de grandes cultivos de virus, que van a ser tratados químicamente para su disgregación e inactivación (por ejemplo el virus del VIH).

2).- Las proteínas resultantes del lisado viral se someten a electroforesis para separarlas por tamaños, fijándolas en un gel de policrilamina (se obtienen proteínas del virus fijo en el gel).

3).- Luego se realiza una transferencia o electrotransferencia (Bloting) de las proteínas separadas  para Inmovilizarlas en papel o membranas de nitrocelulosa, que contiene la proteína (antígeno) que nos interesa del virus.

4).- Luego se coloca el suero del paciente sobre la membrana de nitrocelulosa que contiene la proteína del virus (antígeno) y en dado caso que el suero tenga el anticuerpo (Ig) contra esa proteína va a formar el complejo Ag-Ac. Este es el anticuerpo directo.

5).- Luego se agregan anticuerpos Anti-Ig humana unidos a enzimas específicas, o sea se agrega una Ig que tiene como antígeno la Ig humana que está formando el complejo Ag-Ac. Este es el anticuerpo indirecto.

6).- Luego se agrega el sustrato de la enzima específica que está unida a la anti-Ig humana que se unió al complejo Ag-Ac, y este sustrato sufre la catálisis de la enzima y cambia de color y de esta forma se visualiza las bandas reactivas.

 

En la práctica clínica en el laboratorio solo se realiza del 3 paso en adelante, porque los reactivos ya vienen con las proteínas (antígenos) separados.