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ELISA:

Acrónimo del inglés Enzyme liked Inmuno Sorbent Assay  (ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas), es un método analítico desarrollado en 1.971, el cual depende de la reacción Ag-Ac, utilizando una enzima como marcador para medir la formación del complejo Ag-Ac.

Existen dos métodos de ELISA:

  • Método directo mediante el cual se detectan antígenos,
  • Método indirecto mediante el cual se detecta anticuerpos.

 

El conjugado es un reactivo que ser forma de la unión covalente del marcador enzimático (enzima) con una inmunoglobulina (anticuerpo), las cuales puede ser:

  • Una Ig (anticuerpo) específica para un epítopo del antígeno de interés (usado para el ELISA directo o sándwich), o
  • Una Ig (anticuerpo) específica para un epítopo del anticuerpo que se busca en el fluido corporal, epítopo que corresponde a la porción fija de la Ig (isotipo), usado para el ELISA indirecto.

 

Cuando se utilizan anticuerpos (ELISA directo o sándwich) estos pueden ser de origen monoclonal o policlonal, los cuales pueden estar inmóviles en un soporte sólido (ELISA directo) o ser solubles encontrándose marcados enzimáticamente (conjugado).

 

Cuando se utilizan antígenos estos son producidos por tecnología recombinante y están inmóviles en un soporte sólido (ELISA indirecto).

 

El sustrato es la “sustancia” que se expone a la enzima (marcador enzimático) y entonces al sufrir el efecto cratálico de la enzima cambia de color y este cambio de color es el que se detecta por inmunoabsorción.

 

Mediante ELISA se pueden determinar en cualquier líquido biológico donde se encuentren (suero, orina, saliva, LCR) las siguientes moléculas:

  • Hormonas.
  • Proteínas.
  • Antígenos tumorales.
  • Antígenos de microorganismos (parásitos, bacterias, virus).
  • Anticuerpos contra microorganismos.
  • Drogas y tóxico.

 

ELISA directo o tipo Sándwich:

Por este método se detectan antígenos presentes en algún fluido corporal mediante anticuerpos monoclonales¸ ejemplo buscamos antígenos de superficie del virus de la HB en el suero (antígeno de interés).  La técnica es:

  • Un pocillo de la policubera (bandeja con huecos donde se colocan el suero) posee fijo en sus membranas anticuerpos específicos (monoclonales) para el antígeno de interés, que actúan como anticuerpos de captura.
  • Luego se vierte el fluido corporal en estudio que se sospecha posee el antígeno de interés, el cual al estar presente formará un complejo Ag-Ac con el anticuerpo fijo en la placa.
  • Luego se agrega el conjugado que posee un anticuerpo específico para un epítopo del antígeno que se busca, el cual se encuentra marcado con una enzima; y este conjugado va a formar un complejo con el complejo Ag-Ac previamente formado.
  • Luego se agrega el sustrato de la enzima, para que reaccione con ésta, lo cual hace que cambie el color, el cual es detectado por la inmunoabsorción.
  • Dependiendo la intensidad del color de la reacción se va titulando la cantidad de antígenos presentes en el fluido en estudio (cuantitativo o valor normal).

 

ELISA indirecto:

Por este método se detectan anticuerpos presentes en algún fluido corporal contra un antígeno de interés, ejemplo buscamos anticuerpos que existan en el suero contra el VIH (antígeno de interés).

La técnica es:

  • Un pocillo de la policubera (bandeja con huecos donde se colocan el suero) posee fijo en sus membranas antígenos de interés.
  • Luego se vierte el fluido corporal en estudio que se sospecha posee el anticuerpo contra los antígenos fijos en el pocillo, los cuales al estar presente formará un complejo Ag-Ac con el antígeno fijo en la placa.
  • Luego se agrega el conjugado o sea un anticuerpo específico para un epítopo de los anticuerpos (parte constante de la Ig) que se encuentran en el fluido y que reaccionaron con los antígenos fijo, el cual se encuentra marcado con una enzima; este conjugado forma un complejo con el complejo Ag-Ac previamente formado.
  • Luego se agrega el sustrato de la enzima, para que reaccione con ésta, lo cual hace que cambie el color, el cual es detectado por la inmunoabsorción.
  • Dependiendo la intensidad del color de la reacción se va titulando la cantidad de anticuerpos presentes en el fluido en estudio (cuantitativo o valor normal).