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REACCIÓN EN CADENA A LA POLIMERASA (PCR)

PCR por la sigla en inglés de (Polymerase Chain Reaction) usada desde 1.985, que consiste en obtener miles o millones de copias de uno o unos pocos fragmentos de ADN de interés; partiendo incluso de una única copia  o molde y de esta forma es más fácil identificar un microrganismo, aunque también se puede usar en caso de criminalística.

 

Para llevar a cabo la RCP se necesitan los siguientes “ingredientes”:

  • ADN molde: puede ser un único fragmento de hebra de ADN o pueden ser unos pocos fragmentos, que son los que deseamos replicar; los cuales se obtienen de una muestra, que puede ser suero, tejido, fluidos etc.
  •  Cebadores: es una corta secuencia de los nucleótidos A, G, C y T (20 en promedio) que forman una hebra sencilla de ADN, que se unen al sitio específico del ADN molde a partir del cual deseamos que se replique el AND. En la reacción se utilizan muchos cebadores.
  • Nucleótidos: que van a ser la  materia prima usado para construir la réplica del ADN. En la reacción se utilizan muchísimos nucleótidos.
  • Taq polimerasa: es la no histona  que se encargan de agregar el resto de bases nitrogenadas a la hebra hija a partir del primero cebador. Se llama Taq polimerasa porque se aisló inicialmente en una bacteria tolerante al calor denominada Thermus aquaticus. Es importante que la polimeresa sea resistente al calor porque en el proceso se desnaturaliza la hebra de ADN a replicar mediante calor, y entonces si la polimerasa es lábil al calor se dañaría. En la reacción hay muchas polimerasas Taq.

 

Los pasos son:

1).- Desnaturalización mediante calor (96°C) de la cadena de ADN objetivo a replicar: con el objeto de obtener los moldes de cadena sencilla para el siguiente paso.

2).- Templado (55° - 65°C): la reacción se enfría para que los cebadores o primer puedan unirse a sus secuencias complementarias en el molde de ADN de las cadenas sencillas obtenidas mediante la desnaturalización por calor.

3).- Extensión (72°C): se aumenta la temperatura hasta 72°C en la cual la Taq polimerasa inicia su actividad enzimática extiendo la cadena de ADN a partir de los cebadores o primer utilizando los nucleótidos presentes y de esta forma sintetizando y sintetice así nuevas cadenas de ADN.

5).- Repetición de los pasos anteriores entre 25 y 35 veces, por un periodo de 2 a 4 horas.